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轉錄組-mRNA/lncRNA/circRNA定量

mRNA/lncRNA/circRNA定量介紹

mRNA/lncRNA/circRNA實時定量PCR檢測是高通量篩選后驗證的必選實驗,基于qPCR檢測技術的RNA表達與差異分析是對測序、芯片結果的有效補充和驗證,是確定研究對象并進行后續功能研究或生物標志物發現的有效手段。上海伯豪生物根據不同RNA的特性,提供專業的引物設計和qPCR平臺,可有效保障檢測數據的準確性和可靠性,可檢測包括細胞、組織、血液和外泌體等多種樣本中RNA差異表達情況。

 

伯豪特色

2008年9月,SHBIO和ABI正式簽訂了相關協議,決定在定量PCR服務方面展開全面合作。SHBIO將利用ABI公司在全球享有盛譽的7500和7900定量PCR儀以及相關試劑,如TaqMan探針、Power SYBR Green等為中國的生命科學和生物醫藥產業提供優質、可靠的服務。
上海伯豪生物技術有限公司采用SYBR Green染料法和TaqMan探針法提供專業的實時熒光定量PCR技術服務,以相對定量檢測為主。上海伯豪采用嚴格的質量控制操作流程,完善的預實驗方案等確保引物的特異性和結果的準確性;同時,公司提供人性化的技術服務,得到結果后會提供完整的實驗報告,也會根據您的需要為您提供報告解讀和實驗討論服務。

 

引物設計

  1. 設計區域選擇的合理性:一般選擇相對穩定的3’端,也可根據芯片或者高通量測序結果,選擇合適的引物設計區域,比如覆蓋或者靠近探針序列,使驗證的結果更準確,吻合度更高等;
  2. 嚴格的設計要求:采用Primer Express 3.0.1軟件進行專業的引物設計,嚴格要求引物的Tm值、GC%、二級結構等參數,提高引物的成功率;
  3. 特異性:設計過程中,通過blast比對,確保引物單一特異性產物,從而得到準確的結果,其中,特別關注mRNA和lncRNA的同源序列,避免相互影響;
  4. 人性化服務:引物通過預實驗確定結果的準確性和特異性,失敗的基因會及時跟客戶反饋,可提供二次設計或者替換;
  5. circRNA引物設計:上海伯豪生物為您提供專業的環狀RNA引物設計,針對circRNA拼接位點,設計跨接頭的引物,排除線性RNA的干擾,確保結果的特異性和準確性。

 

TaqMan和SYBR Green實時定量PCR法的比較

 

服務流程

方案設計——合同簽訂與送樣——樣本抽提和質檢——RNA反轉錄——引物設計與合成、預實驗——反饋預實驗結果并調整實驗——正式PCR實驗——數據分析

 

樣本要求

  1. 濃度>10ng/μl,總量>500ng(基因數增加,起始量增加);
  2. RIN>=7.0,28s/18s>=0.7;
  3. OD260/280=1.8-2.1,OD260/230>1.7;
  4. 無真核或原核生物污染,無DNA或蛋白污染。

 

儀器平臺

  1. ABI 7500 Real-Time PCR System;
  2. ABI 7900 HT Sequence Detection System。



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