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CRISPR/Cas9基因敲除服務

CRISPR/Cas9基因編輯服務

背景介紹

CRISPR/Cas(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats),是細菌和古細菌為應對病毒和質粒不斷攻擊而演化來的獲得性免疫防御機制,其主要功能是對抗入侵的病毒及外源DNA。科學家利用CRISPR-Cas系統可以對多種細胞的特定的基因組位點上進行切割,以便插入新的遺傳物質。在需要對目的基因的功能進行破壞,或者要進行目的基因替換時都可以使用CRISPR-Cas系統,可以像編輯文字一樣編輯基因,因此被稱為基因編輯技術。
本技術具有簡便、快捷、精準等優點,于2016年獲得被喻為“豪華諾貝爾獎”的生命科學突破獎。CRISPR/Cas的開發為構建更高效的基因定點修飾技術提供了全新平臺。

sgRNA與靶DNA結合,招募Cas9內切酶形成復合物,Cas9內切酶則切割,斷裂DNA雙鏈,體內啟動DNA修復。在無外源模板的情況下,修復導致DNA移碼突變,蛋白質無法翻譯或者失去功能,達到了基因敲除(Knock-out)的目的。在有外源模板(雙鏈斷裂DNA同源的DNA片段)的情況下,可以通過人為的添加同源的DNA序列達到基因定點敲入(Knock-in)的目的。


CRISPR∕Cas9基因編輯原理



應用CRISPR技術建立miRNA-126的敲除細胞系。上圖為sgRNA設計示意,下圖為篩選陽性克隆電泳圖。由伯豪生物實驗室完成。



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